PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达

编号 zgly0001390206

文献类型 期刊论文

文献题名 PCV-2陕西株ORF2基因的克隆、分析及原核表达

作者 邢福珊  许信刚  童德文  王志昇  刘文静  宁蓬勃  张彦明 

作者单位 西北农林科技大学动物医学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年03期

年份 2010 

分类号 S852.65 

关键词 猪圆环病毒2型  陕西分离株  ORF2基因  序列分析  原核表达 

文摘内容 【目的】克隆猪圆环病毒2型陕西分离株(PCV-2SX株)ORF2基因,并进行序列分析及原核表达。【方法】根据GenBank公布的PCV-2ORF2基因的核苷酸序列,设计并合成1对特异性引物,应用PCR方法扩增PCV-2SX株ORF2全长基因,将其克隆入pGEM-T载体中,进行测序及序列分析。然后,将ORF2基因亚克隆入原核表达载体pET-32a中,在大肠杆菌BL21中进行IPTG诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blotting鉴定。【结果】扩增到了702bp的PCV-2ORF2全长基因。序列分析结果表明,PCV-2SX株ORF2基因与广西分离株(EF675237,ChinaGX)和巴西分离株(DQ861802,am21)的核苷酸序列同源性均达98.0%,氨基酸序列同源性均达98.3%,与其他毒株的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别在89.9%～97.9%和88.5%～98.0%。SDS-PAGE可检测到分子质量约为48ku的融合蛋白,主要以可溶性蛋白形式存在。Western-blotting分析表明,重组蛋白可被PCV-2阳性血清所识别。【结论】成功克隆了PCV-2SX株ORF2基因,并进行了原核表达。