柔嫩艾美耳球虫二氢乳清酸脱氢酶基因注释、克隆与原核表达

编号 zgly0001448943

文献类型 期刊论文

文献题名 柔嫩艾美耳球虫二氢乳清酸脱氢酶基因注释、克隆与原核表达

作者 陈佳  戚南山  廖申权  吴彩艳  吕敏娜  李娟  吴玄光  孙铭飞 

作者单位 华南农业大学兽医学院  广东省农业科学院动物卫生研究所 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2013年07期

年份 2013 

分类号 S852.723 

关键词 柔嫩艾美耳球虫  二氢乳清酸脱氢酶  电子克隆  原核表达 

文摘内容 二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)是催化嘧啶从头合成途径中的关键酶,由于顶复门原虫等低等生物与其宿主的DHODH在分子结构上的差异,可以作为研发新型抗顶复门原虫药物的靶标而成为研究的热点。本研究利用电子克隆策略,以疟原虫DHODH氨基酸基因序列为信息探针,搜索球虫基因库(www.sanger.ac.uk/projects/E-tenella/),拼接注释了柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)DHODH的基因序列,以E.tenella广东株第2代裂殖子总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增获得EtDHODH ORF基因序列。构建重组表达载体pColdⅠ-EtDHODH,进行原核表达。测序结果显示,EtDHODH的基因大小为1 254bp,SDS-PAGE鉴定结果表明,目的蛋白约45ku。本研究重组表达并纯化了EtDHODH基因,为建立以EtDHODH为靶点的抗球虫药物筛选奠定了基础。