核盘菌激发子基因SsCut克隆、原核表达及纯化

编号 zgly0001468402

文献类型 期刊论文

文献题名 核盘菌激发子基因SsCut克隆、原核表达及纯化

作者 吴群  赵同瑶  唐仕妤  高智谋  张华建 

作者单位 安徽农业大学植物保护学院 

母体文献 植物保护学报 

年卷期 2014年05期

年份 2014 

分类号 S432.44 

关键词 核盘菌  激发子  载体构建  原核表达  过敏反应 

文摘内容 为开发以病原菌激发子为主要成分的新型生物农药,根据核盘菌的全基因组数据信息,采用逆转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)技术从核盘菌菌株NGA4克隆到编码角质酶基因的全长c DNA序列,在不同条件下进行原核表达,通过Ni2+亲和层析重组蛋白HisSs Cut,并进行激发子活性检测。序列分析表明,克隆的基因编码核盘菌角质酶开放阅读框为609 bp,预测编码202个氨基酸,并将基因命名为Ss Cut(Sclerotinia sclerotiorum cutinase)。含Ss Cut/p ET32a的表达菌株BL21经异丙基硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导,于28、30和37℃均能产生44.3 k D左右的融合蛋白,其中30℃诱导3 h,融合蛋白表达量最高,浸润的烟草出现过敏性坏死反应。经纯化的蛋白His-Ss Cut和细菌His-Harpin分别浸润烟草叶片出现类似的细胞死亡。表明His-Ss Cut具有激发子的活性。