核盘菌转录因子SsMCM1原核表达与亚细胞定位

编号 zgly0001659605

文献类型 期刊论文

文献题名 核盘菌转录因子SsMCM1原核表达与亚细胞定位

作者 王雪亮  刘言志  吕兴明  张艳华  张祥辉  刘金亮  潘洪玉  张鑫生 

作者单位 吉林大学植物科学学院  长春市绿化管理处 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2019年01期

年份 2019 

分类号 S432.44 

关键词 核盘菌  转录因子  SsMCM1  原核表达  亚细胞定位 

文摘内容 核盘菌[Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary]是一类寄主范围广泛的植物病原真菌。MADS-box蛋白家族基因广泛存在于生物体中,参与调控细胞识别、新陈代谢、细胞周期等。核盘菌转录因子SsMCM1调控其子实体形成与致病性。为进一步揭示SsMCM1的作用机制,本研究以核盘菌野生型菌株uf-70的cDNA为模板,扩增得到SsMCM1基因,并与原核表达载体pET-28a(+)连接,构建成重组质粒转化到大肠杆菌BL21(pLysS)表达菌株中,通过IPTG的诱导和亲和层析,纯化得到SsMCM1蛋白,并以此为抗原获得抗血清,完成效价测定。利用特异性抗血清,与核盘菌不同组织蛋白进行特异性的免疫结合,发现其与核盘菌总蛋白、核盘菌细胞质总蛋白均特异性结合,而核盘菌细胞壁蛋白未发现特异性反应,表明SsMCM1不定位于核盘菌细胞壁上。此外,构建其亚细胞定位载体pCG-1301::SsMCM1,并将重组质粒转化到农杆菌中,通过农杆菌的侵染作用进行瞬时表达,发现SsMCM1定位于细胞核中,作为转录因子调控核盘菌的子实体发育与致病性。