AAT基因转化杂交构树叶片组培筛选研究

编号 zgly0001727687

文献类型 期刊论文

文献题名 AAT基因转化杂交构树叶片组培筛选研究

作者 谢晓阳  魏磊  王伟  景炳年  陈谭星  颜慧萍  曹力凡  常霞  高正龙 

作者单位 河南省生物技术开发中心河南省科学院天然产物重点实验室  河南省高新技术实业有限公司 

母体文献 西部林业科学 

年卷期 2021,50(1)

页码 27-34

年份 2021 

分类号 S722.3  S792 

关键词 杂交构树  载体构建  组织培养  AAT基因  遗传转化 

文摘内容 为了提高杂交构树的组培效率,以蒺藜苜蓿为研究对象,进行生物信息分析,克隆蒺藜苜蓿目的基因AAT,构建表达载体,通过农杆菌转化方法将目的载体转入杂交构树组培叶片中,优化组培相关体系配比,抗生素筛选配比,RT-PCR和定量PCR检验重组植株。结果表明:最佳灭菌体系为75%乙醇消毒20 s,0.3%HgCl 2消毒15 min,污染率低,成活率高;最佳愈伤期激素配比为6-BA 2.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L,最佳壮苗期激素配比为6-BA 1.5 mg/L、NAA 0.2 mg/L。最佳筛选抗生素配比为噻孢霉素(Cef)300 mg/L、潮霉素(Hyg)7.5 mg/L;通过RT-PCR验证试验结果,并通过定量PCR测定AAT基因表达含量,重组植株与野生型相比提高2.5倍。试验首次建立了重组载体遗传转化杂交构树,对叶片组培及筛选方法具有重要意义。