鸡白痢沙门氏菌invA基因的克隆与原核表达

编号 zgly0001641700

文献类型 期刊论文

文献题名 鸡白痢沙门氏菌invA基因的克隆与原核表达

作者 刘志科  张秋雨  杨宁宁  徐锦凤  徐明国  荆明龙  吴文星  曹旭东  任艳  石峰  陈创夫 

作者单位 石河子大学动物科技学院  河南科技学院动物科学学院  石河子大学生命科学学院  石河子大学医学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2018年08期

年份 2018 

分类号 S858.31 

关键词 鸡白痢沙门氏菌  invA基因  原核表达  生物信息学分析  免疫反应性 

文摘内容 【目的】克隆鸡白痢沙门氏菌侵袭蛋白A(invA)基因并进行原核表达,分析重组蛋白invA的抗原性,为沙门氏菌快速诊断试纸条和新型表位疫苗的研发提供理论依据。【方法】以鸡白痢沙门氏菌野毒株为供试菌,克隆其invA基因,对invA基因编码的蛋白进行生物信息学分析。将invA基因克隆到pET-30a原核表达载体上,构建原核重组表达质粒pET-30a-invA,将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western-blot分析,检测其目的蛋白的表达情况和免疫反应特性。【结果】成功获得了1 143bp的完整的invA基因,编码381个氨基酸。生物信息学分析结果表明,invA基因编码的蛋白有17个抗原决定簇,其跨膜区域明显,92-105位氨基酸为low complexity典型结构域。构建获得了原核重组表达质粒pET-30a-invA,在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达了约51ku的invA融合蛋白;Western-blot检测结果显示,该融合蛋白具有良好的免疫反应性。【结论】成功克隆出了1 143bp大小invA基因,明确了其编码蛋白的生物信息,其诱导表达后获得免疫反应性良好的重组蛋白。