基于毛细管电泳技术的牡丹SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

编号 zgly0000784350

文献类型 期刊论文

文献题名 基于毛细管电泳技术的牡丹SRAP-PCR反应体系优化及引物筛选

学科分类 220.1070;森林植物学

作者 史倩倩  王雁  周琳  黄国伟 

作者单位 中国林科院林业研究所 

母体文献 江西农业大学学报 

年卷期 2012,34(1)

页码 158-164

年份 2012 

分类号 S685.11 

关键词 牡丹  SRAP  毛细管电泳  体系优化  引物筛选 

文摘内容 以牡丹叶片DNA为模板,对SRAP-PCR反应程序进行研究,确定适合的反应程序,即94℃预变性5 min;94℃变性1 min,33℃退火1 min,72℃延伸1 min,共5个循环;随后94℃变性1 min,52℃退火1 min,72℃延伸1 min,共35个循环;最后72℃延伸10 min。基于毛细管电泳技术,采用正交设计L18(37)对牡丹SRAP-PCR反应体系的5因素(Taq酶,Mg2+,模板DNA,dNTP,引物)3个水平进行了优化,构建了牡丹SRAP最佳反应体系: 模板DNA 50 ng,dNTP 0.25 mmol/L,Mg2+浓度2.5 mmol/L,引物浓度0.4μmol/L,TaqDNA聚合酶0.5 U,总体积为25μL。各因素对扩增结果影响程度均不同: dNTPs〉引物〉DNA模板〉Mg2+〉Taq酶。运用该体系从756个SRAP引物组合中筛选出多态性好、条带清晰的26个引物组合,并证明了该体系稳定可靠。该体系的建立以及引物组合的确定为今后利用SRAP分子技术进行牡丹的相关研究奠定了科学基础。