来源于解酯菌的嗜热耐碱脂肪酶的表达纯化及其酶学性质研究

编号 zgly0001695800

文献类型 期刊论文

文献题名 来源于解酯菌的嗜热耐碱脂肪酶的表达纯化及其酶学性质研究

作者 许蕊  张昕怡  潘悦  张瑜  李迅  王飞 

作者单位 南京林业大学化学工程学院江苏省生物质绿色燃料与化学品重点实验室 

母体文献 林业工程学报 

年卷期 2020年03期

年份 2020 

分类号 Q55 

关键词 解酯菌  脂肪酶  酶学性质  油酸乙酯 

文摘内容 脂肪酶广泛应用于食品加工、生物柴油制备等领域。为了有效提高微生物脂肪酶的可利用度,将来源于解酯嗜热菌（Thermosyntropha lipolytica DSM 11003）的脂肪酶基因（tll2）克隆到大肠杆菌表达载体pET28a中,获得重组质粒pET28a-TLL2,将pET28a-TLL2转入大肠杆菌BL21（DE3）宿主菌中进行高效表达。通过热处理和镍柱亲和层析得到电泳纯的蛋白TlLip2,对其进行酶学性质表征。结果显示,TlLip2的亚基分子质量为57 ku,比酶活为31 U/mg,最适反应pH及温度分别为8.0和60℃。在60℃以下、pH 6.0～11.0范围内,TlLip2的稳定性较好,相对酶活均维持在60%以上。金属离子K+和Na+对TlLip2有较大激活作用,而Co2+、Zn2+、SDS和Tween 80对TlLip2酶活力抑制作用明显。TlLip2在极性小的有机溶剂中具有较好的耐受性。TlLip2对中等碳链长度的对硝基苯酯显示出更高的活性,其中以对硝基苯己酯为底物时,TlLip2的酶活最高;以对硝基苯棕榈酸酯为底物时,该酶的动力学常数Km为0.29 mmol/L,Vmax为2.28 mmol/(L·min-1),kcat为6.19 s-1。此外,将其应用到油酸乙酯的合成研究中,以油酸和乙醇为底物,研究TlLip2催化制备油酸乙酯的转化条件,结果表明在60℃、加酶量为100 U/g的TlLip2,催化摩尔比为1∶2的油酸和乙醇,12 h后油酸乙酯的转化率达到62.1%,表明TlLip2在催化脂肪酸酯化方面具有较大的应用潜能。