酿酒酵母脂肪酶基因TGL3的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

编号 zgly0000649355

文献类型 期刊论文

文献题名 酿酒酵母脂肪酶基因TGL3的克隆及其在毕赤酵母中的高效表达

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 陈英  卢福芝  曾丽娟  朱绮霞  张搏  韦宇拓  黄日波 

作者单位 广西大学生命科学与技术学院  西科学院国家非粮生物质能源工程技术研究中心 

母体文献 生物技术 

年卷期 2010,20(3)

页码 20-22

年份 2010 

分类号 Q785 Q786 

关键词 酿酒酵母  脂肪酶  基因克隆  毕赤酵母  表达 

文摘内容 目的: 克隆Saccharomy cescerevisiae脂肪酶基因,并实现其在Pichia pastoris中高效表达。方法: 根据NCBIGenBank中已公布的Saccharomyces cerevisiae脂肪酶基因TGL3设计引物,以Saccharomyces cerevisiae总DNA为模板,PCR扩增目的片段,构建重组子pPIC9K-TGL3,转化到Pichia pastoris GS115。结果: 扩增得到1929bp的基因片段,与GenBank中公布的序列氨基酸同源性达99.7%,编码的643个氨基酸中有脂肪酶的保守序列GXSXG,位于235～239位。重组子摇瓶发酵120h发酵液上清脂肪酶酶活达到60U/mL,酶学性质研究表明: 该酶的最适作用温度为40℃,在25℃～40℃之间能保持60%以上酶活力。最适pH值为8.5,在pH6.5～9.0之间能保持50%以上的酶活力。除Al3+和Fe2+外,该酶不受Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Mn2+、Ni+、Sr2+等多种金属离子的影响。结论: 发酵液上清脂肪酶酶活达到60U/mL,是原菌株的10倍,成功实现了该基因的高效表达。