纤细齿梗孢丝氨酸蛋白酶cDNA克隆及其序列分析和表达

编号 zgly0001381597

文献类型 期刊论文

文献题名 纤细齿梗孢丝氨酸蛋白酶cDNA克隆及其序列分析和表达

作者 刘连盟  张亚波  李安娜  李多川 

作者单位 山东农业大学植物病理学系 

母体文献 中国生物防治 

年卷期 2010年03期

年份 2010 

分类号 Q786 

关键词 菌寄生真菌  纤细齿梗孢  丝氨酸蛋白酶  cDNA克隆  毕赤酵母  表达 

文摘内容 纤细齿梗孢Olpitrichum tenellum是一种寄生在轮枝镰孢菌Fusarium verticillioides上的活体营养菌寄生真菌。丝氨酸蛋白酶在菌寄生过程可能起到重要作用。根据丝状真菌丝氨酸蛋白酶的同源保守序列设计简并引物,通过RT-PCR及RACE的方法,克隆得到1845bp的全长cDNA片段。其可读框为1554bp(GenBank登录号为EU368754),编码517个氨基酸的蛋白质。比对分析发现该蛋白是一种分泌型的丝氨酸蛋白酶,属于丝氨酸蛋白酶S8家族的枯草杆菌蛋白酶subtilisin,具有典型的信号肽-前肽-成熟肽的结构。将该基因可读框除去信号肽插入酵母表达载体pPIC9K,转化毕赤酵母Pichia pastoris GS115,在甲醇诱导下成功分泌出具有生物活性的重组蛋白酶,诱导120h后酶活性可达153U/ml。重组蛋白酶经DEAE-Sepharose层析进行纯化,SDS-PAGE分析其分子量为39kD。其反应的最适温度为60℃,最适pH为8。