心肌特异性α-actin启动子重组腺病毒的构建及其鉴定

编号 zgly0001318827

文献类型 期刊论文

文献题名 心肌特异性α-actin启动子重组腺病毒的构建及其鉴定

作者 杨玉艾  孙永科  华进联  窦忠英 

作者单位 西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术中心  西北农林科技大学陕西省干细胞工程技术中心 陕西杨陵712100  陕西杨陵712100 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2007年08期

年份 2007 

分类号 Q78 

关键词 腺病毒载体  α-肌动蛋白启动子  胚胎干细胞 

文摘内容 为了探讨心肌肌动蛋白(α-actin)基因启动子的心肌组织特异性及其表达活性,构建了心肌组织靶向性表达的基因载体,应用PCR从pEGFP-N1-α-actin-P质粒中克隆出α-actin启动子片段,将其插入到切除CMV启动子的腺病毒穿梭载体pAdTrack中,构建出pAdTrack-actin重组穿梭载体,经酶切和测序鉴定正确后用PmeI线性化,与含有腺病毒骨架DNA的pAdEasy-1质粒在BJ5183大肠杆菌细胞中同源重组成新的重组体pAd-easy-actin,抽提重组体DNA,经PacI酶切回收后以脂质体法转染人胚肾细胞株HEK293,包装出完整腺病毒pAd-actin进行PCR检测,并应用蚀斑形成试验测定病毒滴度。结果显示,重组腺病毒中含有α-actin启动子片段,病毒滴度为7×107pfu/mL。表明含心肌α-actin启动子的重组腺病毒pAd-actin构建成功。