西农萨能羊BTN基因RNA干扰序列的筛选及重组腺病毒载体的构建与鉴定

编号 zgly0001376451

文献类型 期刊论文

文献题名 西农萨能羊BTN基因RNA干扰序列的筛选及重组腺病毒载体的构建与鉴定

作者 赵旺生  罗军  王伟  滕炎玲  王桢  林先滋 

作者单位 西北农林科技大学动物科技学院陕西省农业分子生物学重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2010年12期

年份 2010 

分类号 S826.94 

关键词 嗜乳脂蛋白基因  RNA干扰  腺病毒载体 

文摘内容 【目的】构建西农萨能羊BTN基因RNA干扰的重组腺病毒载体,为研究BTN基因的功能和作用机制奠定基础。【方法】设计并合成3对针对BTN不同位点的shRNA编码序列,克隆到pENTR/CMV-GFP/U6-shRNA载体中,并与已构建好的表达BTN的pDsRed1-C1-BTN载体共转染HEK293细胞,筛选有效的干扰序列。通过与腺病毒骨架质粒重组,制备表达干扰BTN基因的shRNA的腺病毒,经PacⅠ线性化后,在HEK293细胞中包装并扩增病毒,用TCID50法进行病毒滴度测定,获得高滴度的病毒上清液。【结果】成功构建了西农萨能羊BTN基因的RNAi腺病毒表达载体,腺病毒经包装和扩增后,病毒滴度可达到5×109PFU/mL。【结论】获得了有功能的pAd/PL-DEST/CMV-GFP/U6-shRNA病毒重组子。