传染性造血器官坏死症重组腺病毒载体的构建

编号 zgly0001632417

文献类型 期刊论文

文献题名 传染性造血器官坏死症重组腺病毒载体的构建

作者 李守湖  范玉锋  高欣  李宝玉  吴鹏程  胡永浩  柳纪省 

作者单位 甘肃农业大学动物医学院  兰州威特森生物科技有限公司  兰州市渔业技术推广中心 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2018年05期

年份 2018 

分类号 S941.414 

关键词 传染性造血器官坏死症  G基因  腺病毒载体 

文摘内容 【目的】克隆传染性造血器官坏死症病毒（IHNV）G基因,构建其重组腺病毒载体,为IHN预防及疫苗的研制提供参考。【方法】通过RT-PCR和PCR技术扩增IHNV G基因,将G基因插入到腺病毒穿梭载体中,再用带有目的基因的腺病毒载体与骨架载体在大肠杆菌BJ5183中同源重组,构建重组腺病毒质粒,通过PCR扩增及SalⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定,经PacⅠ酶切后转染HEK-293细胞进行包装,获得带有目的基因的重组腺病毒,通过观察绿色荧光蛋白表达情况来监控重组腺病毒,用Western-blot法检测糖蛋白的表达,并测定重组腺病毒的TCID50。【结果】成功克隆出IHNVG基因,其长度为1 533bp。成功构建了IHNV G蛋白重组腺病毒载体。GFP监测显示,重组腺病毒转染成功。重组腺病毒能在HEK-293细胞中表达出分子质量约58ku的产物,与预期相符,其TCID50达到1.0×1010.4mL-1。【结论】成功构建了带有IHNVG基因的重组腺病毒载体,重组腺病毒能高效表达,滴度较高。