中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因表达载体的构建及原核表达

编号 zgly0001469476

文献类型 期刊论文

文献题名 中国美利奴绵羊磷脂酶C zeta基因表达载体的构建及原核表达

作者 木尔扎提·阿勒腾别克  刘强  贺志锐  王银龙  乌热力哈孜  赛务加甫 

作者单位 石河子大学动物科技学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2014年12期

年份 2014 

分类号 S826  Q78 

关键词 磷脂酶C zeta蛋白  原核表达  Western blot 

文摘内容 构建美利奴绵羊磷脂酶C zeta(PLCζ)融合蛋白表达载体,并在原核细胞内表达及纯化,为其特异性抗体的制备及生物学功能研究奠定基础。用PCR技术扩增出PLCζ基因片段,亚克隆到原核表达载体pCzn1中,导入Arctic Express TM(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,收样后进行SDS-PAGE电泳或Western blot检验PLCζ的表达情况。用镍离子亲和层析的方法大量纯化融合蛋白。结果显示,重组质粒经PCR、酶切和测序鉴定证明载体构建正确。pCzn1表达载体在Arctic Express TM(DE3)表达菌中能很好地表达融合蛋白。表达纯化后可获得了分子量约74ku的融合蛋白,符合预期大小。成功构建pCzn1-PLCζ原核表达载体,表达并纯化了其融合蛋白,Western blot试验表明其蛋白分子的完整性良好,这将有利于对PLCζ蛋白进行深入的研究。