小麦叶片蛋白质组分析中高丰度蛋白Rubisco酶的快速去除方法研究

编号 zgly0001412208

文献类型 期刊论文

文献题名 小麦叶片蛋白质组分析中高丰度蛋白Rubisco酶的快速去除方法研究

作者 李红兵  康振生 

作者单位 西北农林科技大学生命科学学院陕西省农业分子生物学重点实验室 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年06期

年份 2011 

分类号 S512.1 

关键词 蛋白质组  小麦叶片  分离技术  Western blot  双向电泳 

文摘内容 【目的】建立一种小麦叶片蛋白质组分析时去除全蛋白提取物中高丰度蛋白Rubisco酶的方法,为富集低丰度蛋白,提高双向电泳灵敏度提供技术支持。【方法】采用分离技术,以铭贤169小麦苗期叶片为材料,使用不同浓度(1,2,5,10 mmol/L)的肌醇六磷酸钠,结合二水氯化钙在不同温度(4,20,37℃)去除小麦叶片蛋白中的Rubi-sco酶,筛选去除小麦叶片蛋白Rubisco酶的最佳条件,并采用一维凝胶电泳(1-DE)、Western blot方法检测去除Rubisco酶的有效性,用二维凝胶电泳(2-DE)评估该方法对样品在二维凝胶上分辨率的影响。【结果】在37℃条件下,采用10 mmol/L肌醇六磷酸钠结合10 mmol/L的二水氯化钙去除小麦叶片蛋白中的Rubisco酶,可以获得较好的去除效果。在上述条件下作用10 min,小麦叶片水溶性蛋白提取物中超过80%的Rubisco酶得以沉淀去除,二维电泳图谱上有更多的低丰度蛋白点显现,且水平条纹明显减少,分辨率有所提高。【结论】得到了一种用于小麦叶片蛋白质组分析时去除高丰度蛋白Rubisco酶的方法,该方法具有快速、高效、成本低的特点。