产肠毒素大肠埃希菌K99菌毛基因的克隆与原核表达

编号 zgly0001469580

文献类型 期刊论文

文献题名 产肠毒素大肠埃希菌K99菌毛基因的克隆与原核表达

作者 姜宣鹏  张焕容 

作者单位 西南民族大学生命科学与技术学院  动物医学四川省高等学校重点实验室 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2014年05期

年份 2014 

分类号 S852.61 

关键词 产肠毒素大肠埃希菌  K99菌毛  克隆  原核表达  抗原性 

文摘内容 本试验采用产肠毒素大肠埃希菌(ETEC)K99菌毛基因完整编码框的特异性引物,以牛源大肠埃希菌C83912基因组DNA为模板,扩增出大小为498bp的ETEC K99菌毛基因完整编码框,克隆至pMD19-T载体,阳性重组质粒pMD19-T-K99经PCR、双酶切鉴定和测序正确后,双酶切产物与pET-32a(+)载体连接,构建原核表达载体pET-32a(+)-K99,转化原核表达工程菌BL21(DE3),阳性转化子经IPTG诱导获高效表达,Western blot证明原核表达的K99重组蛋白能与K99单因子血清发生特异性反应,重组蛋白免疫家兔后可产生特异性抗体,证明重组蛋白具有良好的抗原性。ETEC K99原核表达质粒的构建和表达产物抗原性研究,为进一步研究K99亚单位疫苗以及制备K99特异性抗体奠定了基础。