草莓镶脉病毒ORFⅡ基因的克隆、原核表达与抗血清制备

编号 zgly0001445727

文献类型 期刊论文

文献题名 草莓镶脉病毒ORFⅡ基因的克隆、原核表达与抗血清制备

作者 蒋磊  邓竹根  谢朝阳  杨友志  李祥宇  丁菲  江彤 

作者单位 安徽农业大学植物保护学院  德州经济开发区东艺园林有限公司 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2013年01期

年份 2013 

分类号 S436.68 

关键词 草莓镶脉病毒  ORFⅡ基因  克隆  原核表达  多抗血清 

文摘内容 用CTAB法从感染草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)的草莓叶片中提取总DNA,设计特异性引物扩增SVBV中国分离物ORFⅡ基因,克隆并测序。结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因全长486 nts,编码161个氨基酸。将其与SVBV美国分离物以及花椰菜花叶病毒属其他成员的ORFⅡ基因相比较,结果表明,SVBV中国分离物ORFⅡ基因与SVBV美国分离物的核苷酸序列相似性最高,达91.2%。将SVBV ORFⅡ基因插入原核表达载体pET32a(+),重组质粒pET-ORFⅡ转化大肠杆菌BL21(DE3)。经IPTG诱导及Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为38 kDa的融合蛋白。以此纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,可以制备出高效价的抗血清。Western blot分析表明,制备的抗血清能与重组融合蛋白发生特异性反应。利用抗血清进行ELISA测定,能够检测出感病草莓植株病汁液中SVBV ORFⅡ基因表达的蛋白。