草莓镶脉病毒ORF Ⅵ基因的原核表达与抗血清制备

编号 zgly0001447572

文献类型 期刊论文

文献题名 草莓镶脉病毒ORF Ⅵ基因的原核表达与抗血清制备

作者 江彤  谢朝阳  丁菲  李祥宇  贾琳 

作者单位 安徽农业大学植物保护学院  山东德州经济开发区东艺园林有限公司 

母体文献 植物保护学报 

年卷期 2013年06期

年份 2013 

分类号 S436.684 

关键词 草莓镶脉病毒  ORFⅥ基因  原核表达  抗血清 

文摘内容 为了分析草莓镶脉病毒(Strawberry vein banding virus,SVBV)ORFⅥ基因的功能,采用原核表达技术获得该基因表达的重组蛋白并制备其抗血清。利用PCR技术扩增得到SVBV中国分离物的ORFⅥ基因,将此基因克隆到原核表达载体pET-SUMO上,获得重组质粒pET-SUMO-ORFⅥ。转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经IPTG诱导与Ni2+-NTA亲和柱纯化,获得分子质量约为90 kD的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫家兔制备抗血清,采用间接ELISA和Western blot方法测定抗血清的效价、反应灵敏度以及ORFⅥ基因在本氏烟中的瞬时表达。结果显示,间接ELISA法测定抗血清对重组蛋白的效价达1∶256 000,Western blot法能够检测到稀释64 000倍的重组蛋白。利用稀释2000倍的抗血清,仍能够检测出SVBV中国分离物和美国分离物ORFⅥ基因在本氏烟中瞬时表达的蛋白。