检测创伤弧菌两种毒力基因的环介导等温扩增检测方法的建立

编号 zgly0001572180

文献类型 期刊论文

文献题名 检测创伤弧菌两种毒力基因的环介导等温扩增检测方法的建立

作者 别闯南  王权  白雪瑞  凌娇  李恭贺  蒋蔚 

作者单位 广西大学  中国农业科学院上海兽医研究所 

母体文献 中国动物传染病学报 

年卷期 2018年01期

年份 2018 

分类号 TS207.4 

关键词 环介导等温扩增  溶血素A基因  多重毒素  创伤弧菌 

文摘内容 为建立快速检测致病性创伤弧菌两种毒素的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)方法,分别以创伤弧菌溶血素A基因(hemolysin gene A,HA)和多重毒素(repeats in toxin,RTX)毒力基因的保守序列作为靶序列设计内、外引物。通过肉眼观察白色沉淀初步判断检测结果,通过琼脂糖电泳最终确定检测结果。LAMP检测创伤弧菌的两种基因的灵敏度都达到10 CFU/mL。特异性结果表明致病性创伤弧菌的结果为阳性,而其他几种常见弧菌和食源菌检测结果为阴性。在人工模拟样品检测中,LAMP结果显示,采用水煮法提取DNA,从样品处理到报告结果耗时1.5 h,鱼肉中创伤弧菌的检出限为1×10~2 CFU/g(RTX)和1×10~4 CFU/g(HA);采用同样方法提取DNA进行普通PCR,其检出限为1×10~3 CFU/g(RTX)和1×10~4 CFU/g(HA),耗时4 h。结果表明,本研究建立的LAMP方法检测创伤弧菌两种毒力基因时具有灵敏度高、特异性强、方法简便等优点,适用于食品和养殖业中的现场快速检测。