山生柳SSR-PCR反应体系优化

编号 zgly0001619109

文献类型 期刊论文

文献题名 山生柳SSR-PCR反应体系优化

作者 郭敏  李毅  马彦军 

作者单位 甘肃农业大学林学院 

母体文献 草业科学 

年卷期 2012年05期

年份 2012 

分类号 S793.9 

关键词 山生柳  SSR-PCR  体系优化 

文摘内容 本研究以祁连山4个海拔梯度的山生柳(Salix oritrepha)为材料,采用L9(34)正交试验设计和单因子试验,分析山生柳SSR技术中PCR体系的主要成分对扩增结果的影响,并对引物SHUK123的适宜退火温度进行优化。结果表明,PCR反应体系的最佳条件:20μL体系中2.0mmol·L-1 Mg2+1μL,0.10mmol·L-1 dNTPs1.5μL,0.5UTaq酶用量为1μL,20ng·μL-1 DNA模板1μL,0.5μmol·L-1的上下游引物各2μL,10×TaqBuffer 2μL,ddH2O加至20μL。扩增反应程序:94℃高温预变性时间3min,94℃变性45s,Tm(不同退火温度)退火时间45s,72℃延伸30s,循环数30个,最后72℃后延伸时间5min,4℃保温。适宜退火温度为56℃。以上结果表明,此反应体系在山生柳PCR扩增中的稳定性和可重复性较好。