芜菁花叶病毒长春分离物p3基因的克隆、序列分析及P3蛋白抗血清的制备

编号 zgly0001485357

文献类型 期刊论文

文献题名 芜菁花叶病毒长春分离物p3基因的克隆、序列分析及P3蛋白抗血清的制备

作者 张雅琦  祝富祥  王凤婷  潘洪玉  李向东  刘金亮 

作者单位 吉林大学植物科学学院  山东农业大学植物保护学院 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2015年06期

年份 2015 

分类号 S432.41 

关键词 芜菁花叶病毒  p3基因  序列分析  原核表达  抗血清制备 

文摘内容 用RT-PCR方法从长春感染芜菁花叶病毒(Turnip mosaic virus,TuMV)的十字花科蔬菜中扩增获得该病毒的p3基因,并对其序列进行了比较分析。结果表明,本研究所获得的10个TuM V分离物p3基因含1 065个核苷酸,其序列一致率为98.8%~99.6%,与GenBank中其他15个TuMV分离物核苷酸一致率为80.9%~99.4%。根据p3基因核苷酸序列构建的系统进化树显示:25个TuMV分离物可分为4个组,本研究得到的10个TuMV分离物均属于basal-BR组。将TuMV JCR06分离物p3基因N端663 by片段克隆至原核表达载体pET-28a(+)并在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中表达出分子量约为28 kDa的融合蛋白。以纯化的融合蛋白为抗原免疫家兔,制备了P3蛋白的特异性抗血清。以TuMV侵染的萝卜为抗原,间接ELISA测定抗血清的效价为1:2 048。Western blotting分析表明,制备的抗血清能与诱导表达的融合蛋白发生特异性反应。