水稻条纹病毒四川省会东县分离物p3基因序列分析及其蛋白抗体制备

编号 zgly0001674874

文献类型 期刊论文

文献题名 水稻条纹病毒四川省会东县分离物p3基因序列分析及其蛋白抗体制备

作者 吴根土  郑桂贤  李明骏  孙现超  禳菁  青玲 

作者单位 西南大学植物保护学院植物病害生物学重庆市高校级重点实验室  四川省凉山彝族自治州会东县农牧局 

母体文献 植物保护学报 

年卷期 2019年03期

年份 2019 

分类号 S435.111.4 

关键词 水稻条纹病毒  p3基因  序列分析  原核表达  多克隆抗体 

文摘内容 为探讨水稻条纹病毒(Rice stripe virus,RSV)四川省会东县分离物p3基因的遗传变异并获得其蛋白抗体,采用斑点酶联免疫吸附测定(dot enzyme-linked immunosorbent assay,Dot-ELISA)检测四川省会东县水稻植株;利用反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)技术克隆了RSV p3基因,并利用MEGA 5.0软件构建其发育进化树;通过原核表达方法获得纯化蛋白,免疫家兔获得其多克隆抗体,并用Western blot方法检测其效价。结果显示,从四川省会东县水稻种植区共采集13份水稻植株病样,经Dot-ELISA检测有3份样品呈阳性;通过RT-PCR技术从阳性样品中扩增获得RSV四川省会东县分离物Huid04(GenBank登录号KX611339)p3基因全长,长度为636 nt;系统进化分析显示该分离物与KunM08(GenBank登录号为JQ927423)和DaL08(GenBank登录号为JQ927420)2个云南分离物的核苷酸相似性最高,分别为96.86%和97.01%;将重组质粒pET-32a/p3转化至大肠杆菌Escherichia coli表达菌株BL21pLysS,经异丙基硫代-β-半乳糖苷诱导后,获得了分子量为40 kD的融合p3蛋白;并将纯化蛋白免疫家兔后获取抗血清,经ELISA及Western blot检测验证其为RSV p3蛋白的多克隆抗体,且效价为1∶2 000。以转RSV p3基因本氏烟为材料,利用Western blot技术证明了该抗体可用于检测RSV p3蛋白。