家蚕核型多角体病毒egt基因的原核表达及侵染BmE细胞中的EGT蛋白检测

编号 zgly0001447849

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕核型多角体病毒egt基因的原核表达及侵染BmE细胞中的EGT蛋白检测

作者 刘红玲  林英  杨从文  张梅  朱传民  孙晛  夏庆友 

作者单位 家蚕基因组生物学国家重点实验室  西南大学生物技术学院 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2013年06期

年份 2013 

分类号 S884.51 

关键词 家蚕核型多角体病毒  蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶  原核表达  免疫印迹分析 

文摘内容 杆状病毒的蜕皮甾体尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶(ecdysteroid UDP glucosyltransferase,EGT)能使宿主昆虫体内的蜕皮激素失去活性而延迟蜕皮和化蛹,以利于病毒大量繁殖。从家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组DNA中扩增获得egt基因全长序列片段,利用原核表达载体pET28a在大肠杆菌BL21(DE3)菌株中进行IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测发现EGT蛋白以包涵体形式表达,并且在16℃条件下以0.4 mmol/L IPTG诱导20 h目的蛋白质的表达量最高。采用镍柱亲和层析和切胶回收的方法获得纯化的EGT蛋白,并制备兔源多克隆抗体,其效价>5.12×105。Western blotting检测发现BmNPV侵染BmE细胞后48 h开始有EGT蛋白合成,并一直持续到144 h细胞基本死亡时还存在大量的EGT蛋白。这些结果为进一步研究BmNPV与宿主的相互作用机制提供了一定的线索,也暗示可以利用EGT蛋白调控家蚕蜕皮激素含量,使开发永久蛹成为可能。