柞蚕微孢子虫孢壁蛋白基因NpSWP1的克隆及序列分析与原核表达

编号 zgly0001468678

文献类型 期刊论文

文献题名 柞蚕微孢子虫孢壁蛋白基因NpSWP1的克隆及序列分析与原核表达

作者 文竹  姜义仁  王斌赫  孙影  李喜升  王勇  秦利 

作者单位 沈阳农业大学生物科学技术学院  辽宁省昆虫资源工程技术研究中心  沈阳农业大学植物保护学院 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2014年04期

年份 2014 

分类号 S884.21 

关键词 柞蚕微孢子虫  孢壁蛋白  基因克隆  原核表达  免疫印迹分析 

文摘内容 微孢子虫孢壁蛋白在侵染宿主的过程中发挥着重要作用。从已构建的柞蚕微孢子虫cDNA文库中筛选出一条孢壁蛋白基因的EST序列,并结合柞蚕微孢子虫感染柞蚕中肠的转录组数据设计特异性引物进行RT-PCR和3’-RACE扩增,克隆得到了一个柞蚕微孢子虫孢壁蛋白基因。该基因ORF长837 bp,编码278个氨基酸,蛋白质分子质量32.02 kD,等电点(pI)7.02。通过Blast比对分析,该基因与家蚕微孢子虫孢子内壁蛋白基因NbSWP1(GenBank登录号:EOB12097.1)的序列相似度为85%,二者编码的氨基酸序列相似度达79%,将该基因命名为NpSWP1(GenBank登录号:KJ573111),初步推测NpSWP1是一种孢子内壁蛋白。将NpSWP1基因与原核表达载体pEASY-E1连接,构建原核表达重组质粒并转化Transetta(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导5 h后,SDS-PAGE和Western blot检测重组菌液能够产生与预期结果相近的大小约32 kD的目的融合蛋白。研究结果有利于进一步开展NpSWP1的细胞定位和功能研究。