葡萄卷叶伴随病毒-3外壳蛋白的原核表达及其特异性抗血清的制备

编号 zgly0001380418

文献类型 期刊论文

文献题名 葡萄卷叶伴随病毒-3外壳蛋白的原核表达及其特异性抗血清的制备

作者 徐章逸  王国平  刘亚萍  王彩霞  洪霓 

作者单位 湖北省作物病害监测和安全控制实验室  华中农业大学国家果树脱毒种质资源室内保存中心 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2010年02期

年份 2010 

分类号 S436.631 

关键词 GLRaV-3  cp  基因克隆  原核表达  PAS-ELISA  DBIA 

文摘内容 利用RT-PCR技术扩增得到了葡萄卷叶伴随病毒-3(Grapevine leafroll associated virus-3,GLRaV-3)中国分离物的外壳蛋白(coat protein,cp)基因。序列分析结果表明,cp基因的长度为942bp,与已报道的其它GLRaV-3分离物的cp核苷酸相似性为91%～99%,编码的氨基酸相似性为95%～100%。将此基因克隆到原核表达载体pET-28a(+)上,转化大肠杆菌BL21(DE3)plysS后用终浓度为1mmol/L的IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE及Western blotting分析表明,cp在大肠杆菌中可表达出分子量约为35kDa的蛋白。纯化表达产物后免疫家兔制备抗血清。A蛋白酶联免疫吸附测定(PAS-ELISA)及斑点免疫结合测定(DBIA)结果显示,制备的特异抗血清可用于检测田间感病葡萄样品中的GLRaV-3。