葱蝇非滞育蛹的全长cDNA文库构建

编号 zgly0000700467

文献类型 期刊论文

文献题名 葱蝇非滞育蛹的全长cDNA文库构建

学科分类 220.3020;森林昆虫学

作者 黎万顺  陈斌  冯国忠  李廷景 

作者单位 重庆师范大学昆虫与分子生物学研究所重庆高校生物活性物质工程研究中心重庆高校动物生物学重点实验室 

母体文献 重庆师范大学学报: 自然科学版 

年卷期 2010(1)

页码 21-25

年份 2010 

分类号 Q966 

关键词 葱蝇  非滞育蛹  全长cDNA文库  SMART技术 

文摘内容 葱蝇具有兼性滞育的特性且与果蝇近缘, 是昆虫滞育分子机理和冬滞育和夏滞育专化基因比较研究的理想模式种, 本研究目的在于构建葱蝇非滞育蛹的全长cDNA文库, 为进一步的滞育专化基因筛选、克隆和表达分析奠定基础。利用RNAiso试剂提取葱蝇非滞育蛹的总RNA, 采用SMART技术合成全长cDNA, 将限制性内切酶Sfi I消化后的cDNA克隆到质粒载体pDNR-LIB, 转化入大肠杆菌(DH10B), 获得原始文库。经过涂平板测定表明, 原始文库的库容量为2.3×10^7个单克隆; 随机挑取15个单克隆, 通过PCR快速鉴定, 插入片段大小在0.4～1.2kb之间, 平均大小在0.9kb, 重组率达100%。这些结果表明本研究所构建文库的代表性和重组片段的序列完整性达到了用于目的基因的分离筛抗和克隆表达的建库要求。