东北梅花鹿鹿茸尖端组织全长cDNA文库的构建

编号 zgly0001350248

文献类型 期刊论文

文献题名 东北梅花鹿鹿茸尖端组织全长cDNA文库的构建

作者 郝丽  李和平  严厉 

作者单位 东北林业大学 

母体文献 东北林业大学学报 

年卷期 2009年11期

年份 2009 

分类号 S865.42  Q78 

关键词 东北梅花鹿  鹿茸  全长cDNA文库  SMART技术 

文摘内容 为克隆出与鹿茸生长发育相关基因的全长序列,采用SMART技术构建了东北梅花鹿鹿茸尖端组织的全长cDNA文库。用SVTotal RNAIsolation System试剂盒提取总RNA,以逆转录酶PowerScriptTM反转录合成第一链cDNA,然后通过LD-PCR合成并扩增ds cDNA。扩增产物经纯化、SfiⅠ酶切、过CHROMASPIN-400柱去除小片段后,连接到SfiⅠ消化过的pDNR-LIB质粒载体中,最后用电转化法将重组质粒转化到E.coliDH5α内得到原始文库。经测定,构建的原始文库约含有2.56×106个重组子,插入片段多在0.5～2 kb之间,平均插入片段长度约1.1 kb,重组效率接近100%。结果表明,东北梅花鹿鹿茸尖端组织的全长cDNA文库已构建成功。