链孢粘帚霉HL-1-1内切葡聚糖酶基因克隆及功能分析

编号 zgly0001459777

文献类型 期刊论文

文献题名 链孢粘帚霉HL-1-1内切葡聚糖酶基因克隆及功能分析

作者 张晔  孙漫红  李世东  罗明 

作者单位 中国农业科学院植物保护研究所/农业部作物有害生物综合治理重点实验室  新疆农业大学农学院 

母体文献 中国生物防治学报 

年卷期 2013年01期

年份 2013 

分类号 S476.1 

关键词 链孢粘帚霉  内切葡聚糖酶  核盘菌  基因敲除转化子  荧光定量PCR  菌寄生 

文摘内容 为研究链孢粘帚霉Gliocladium catenulatum HL-1-1寄生核盘菌菌核的相关基因,从实验室前期构建的差异表达cDNA文库中随机挑选504个阳性克隆进行测序和比对分析,获得内切葡聚糖酶基因,并命名为eg8-20。该基因与木霉Trichoderma sp.SSL内切葡聚糖酶基因的同源性高达94%。采用RACE技术获得了eg8-20全长cDNA,该基因长度为1479 bp(GenBank登录号JQ728996),开放阅读框(ORF)长1269 bp,编码423个氨基酸。对HL-1-1菌株在菌核粉培养基中内切葡聚糖酶基因表达水平的定量监测结果表明,eg8-20表达水平随菌核诱导培养时间的延长而提高,96 h后表达量升高9倍。为进一步验证其功能,通过同源重组将G418抗性标记基因定点插入到链孢粘帚霉HL-1-1中,获得eg8-20缺失转化子ED-3。表型研究发现,基因敲除转化子的生长速度、产孢量与野生型无显著差异。室内生物测定表明,转化子能够抑制核盘菌菌核萌发,但其侵染能力明显减弱,寄生级别由野生型菌株的四级降为二级,证明内切葡聚糖酶在链孢粘帚霉寄生核盘菌菌核过程中发挥着重要的作用。