葡萄病毒B外壳蛋白原核表达及抗血清制备

编号 zgly0001525311

文献类型 期刊论文

文献题名 葡萄病毒B外壳蛋白原核表达及抗血清制备

作者 任芳  董雅凤  张尊平  范旭东  胡国君  李正男  周俊 

作者单位 中国农业科学院果树研究所国家落叶果树脱毒中心 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2016年11期

年份 2016 

分类号 S436.631 

关键词 葡萄病毒B  外壳蛋白  原核表达  抗血清 

文摘内容 根据已报道的葡萄病毒B(Grapevine virus B,GVB)核苷酸序列设计引物,采用RT-PCR方法从葡萄中扩增获得GVB外壳蛋白基因(cp),大小为594 bp。通过序列测定和分析,选取优势分离物GVB-JFL cp基因克隆到原核表达载体pET-28a,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达并纯化融合蛋白pET-GVB CP。SDS-PAGE电泳结果显示,融合蛋白获得过量表达,分子量约26 kD。以纯化蛋白为抗原免疫新西兰大耳白兔制备抗血清。采用间接ELISA和dot-ELISA对抗血清特异性进行检测,结果表明,抗血清可与感染GVB的西方烟和葡萄样品发生阳性反应,与健康植株及感染同属另一种病毒葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)的样品不反应,阳性样品检测效价达1︰4 000,16个田间样品摩擦接种至烟草后有9个样品ELISA检测为阳性,表明制备的抗血清可用于GVB的特异性检测。