西瓜花叶病毒抗血清制备及其应用

编号 zgly0001655288

文献类型 期刊论文

文献题名 西瓜花叶病毒抗血清制备及其应用

作者 冀树娴  王姝雯  王健  李向东  朱天生  田延平 

作者单位 山东农业大学植物保护学院植物病理学系  山东省农业微生物重点实验室  塔里木大学植物科学学院 

母体文献 植物病理学报 

年卷期 2018年06期

年份 2018 

分类号 S432.41 

关键词 抗血清  外壳蛋白  原核表达  西瓜花叶病毒 

文摘内容 西瓜花叶病毒(Watermelon mosaic virus,WMV)是危害葫芦科作物的重要病毒。制备特异性强、效价高的抗血清对快速准确检测和鉴定WMV具有重要意义。本研究将WMV外壳蛋白(Coat protein,CP)基因克隆到原核表达载体pEHISTEV获得pEHISTEV-WMV-CP。将pEHISTEV-WMV-CP转化大肠杆菌Rosetta,经IPTG诱导,成功表达出分子量约为36 kDa的蛋白,与预期WMV CP大小一致。切胶回收WMV CP,与等体积弗氏不完全佐剂充分乳化后免疫健康新西兰大白兔。Western blotting结果表明,制备的抗血清与WMV CP有反应,与同属的番木瓜环斑病毒(Papaya ringspot virus,PRSV)、马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)、小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)和烟草花叶病毒属的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)均无反应。酶联免疫吸附测定(PTA-ELISA)结果表明,本研究制备的WMV抗血清效价为1∶8192,并且能够检测稀释512倍的病毒汁液。利用该抗血清对田间采集的10个RT-PCR检测为阳性的样品进行检测,全部呈现阳性。本研究利用大肠杆菌表达的CP制备的WMV抗血清具有较高的特异性和灵敏度。研究结果为WMV的快速检测和鉴定奠定了基础。