辣椒脉斑驳病毒CP基因的原核表达及其抗血清的制备

编号 zgly0001380213

文献类型 期刊论文

文献题名 辣椒脉斑驳病毒CP基因的原核表达及其抗血清的制备

作者 吴育鹏  王健华  冯团诚  张雨良  王小明  刘志昕 

作者单位 中国热带农业科学院热带生物技术研究所  农业部热带作物生物技术重点开放实验室  海南大学环境与植物保护学院 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2010年10期

年份 2010 

分类号 S436.418 

关键词 辣椒  辣椒脉斑驳病毒  外壳蛋白  原核表达  抗血清 

文摘内容 采用RT-PCR方法克隆了辣椒脉斑驳病毒文昌分离物(ChiVMV-WC)的CP基因,并将其连接到原核表达载体pET-30b(+)上,克隆测序以确定其阅读编码框的正确性,然后将获得的重组质粒pET30b-ChiVMVCP转化大肠杆菌Rosetta(DE3)后,用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE分析结果表明,CP基因在大肠杆菌中获得了高效表达,获得的融合蛋白分子量约为38kD。用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化的融合蛋白免疫兔子并获得抗血清。Western blot检测结果表明,抗血清与诱导表达的ChiVMV-WC编码CP蛋白发生特异性反应。间接酶联免疫吸附法(ID-ELISA)检测抗血清效价为1/106。通过对田间20个样品的ID-ELISA检测,证实了所制备的抗血清与ChiVMV病叶具有良好的反应特异性。