紫椴ISSR-PCR反应体系的建立与优化

编号 zgly0001307109

文献类型 期刊论文

文献题名 紫椴ISSR-PCR反应体系的建立与优化

作者 穆立蔷  刘赢男  冯富娟  杨国亭 

作者单位 东北林业大学  东北林业大学 哈尔滨150040  哈尔滨150040 

母体文献 林业科学 

年卷期 2006年06期

年份 2006 

分类号 S792.36  S897.1 

关键词 紫椴  ISSR-PCR  正交设计  单因子试验  梯度PCR 

文摘内容 分别采用单因子试验和正交设计2种方法对影响紫椴ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶,Mg2+,dNTP,引物)在3个水平上进行优化试验。正交设计选用L9(34)方案,采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况,找出最佳反应水平。2种方法所得影响因素最佳水平存在差异,通过综合比较与分析,最终建立了紫椴ISSR-PCR的最佳反应体系:在20μL的反应体系中,Taq酶1·0U,Mg2+2·0mmol·L-1,dNTP0·20mmol·L-1,引物0·4μmol·L-1,1×PCRbuffer,30ng模板DNA。在此基础上筛选出14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物,并通过梯度PCR试验,确定引物最佳退火温度。