利用正交设计法对叉叶苏铁ISSR—PCR反应体系的优化研究

编号 zgly0000578167

文献类型 期刊论文

文献题名 利用正交设计法对叉叶苏铁ISSR—PCR反应体系的优化研究

作者 莫鹏巧  黄玉源  钟晓青  刘广林  李正文  农保选 

作者单位 广西大学农学院  仲恺农业技术学院生命科学学院  中山大学生命科学学院  广西农业科学院 

母体文献 植物研究 

年卷期 2008,28(3)

页码 304-309

年份 2008 

分类号 Q949  Q94-336 

关键词 叉叶苏铁  ISSR-PCR  正交设计  单因子试验 

文摘内容 比较CTAB法和SDS法提取叉叶苏铁(Cycas micholitzii)的总DNA，发现CTAB法是提取叉叶苏铁总DNA的较好方法；对叉叶苏铁ISSR-PCR反应体系中的4个主要因素dNTPs，Taq DNA聚合酶，引物及Mg^2＋进行最优条件筛选；采用单因素法探讨DNA模板量、退火温度和循环次数的最佳反应条件，建立了适合于叉叶苏铁的最佳ISSR—PCR反应体系(20μL体系)：1×Buffer，75ng DNA模板，dNTPs250μmol·L^-1，Tatl酶1．0U，引物0．2μmol·L^-1，Mg^2＋ 2．5mmol·L^-1，反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min，52℃退火1min，72℃延伸2min，循环40次，72℃延伸10min，4℃保存。本研究结果为苏铁纲植物的分子生物学和分子系统学研究提供理论参考。