紫椴ISSR—PCR反应体系的建立与优化

编号 zgly0000391849

文献类型 期刊论文

文献题名 紫椴ISSR—PCR反应体系的建立与优化

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 穆立蔷  刘赢男  冯富娟  杨国亭 

作者单位 东北林业大学 

母体文献 林业科学 

年卷期 2006,42(6)

页码 26-31

年份 2006 

分类号 S718.46 

关键词 紫椴  ISSR-PCR  正交设计  单因子试验  梯度PCR 

文摘内容 分别采用单因子试验和正交设计2种方法对影响紫椴ISSR-PCR反应体系的4个因素(Taq酶, Mg^2+, dNTP, 引物)在3个水平上进行优化试验。正交设计选用L^9(3^4)方案, 采用直观分析法获得影响因素最佳反应水平。单因子试验分别研究各因素对ISSR-PCR反应的影响情况, 找出最佳反应水平。2种方法所得影响因素最佳水平存在差异, 通过综合比较与分析, 最终建立了紫椴ISSR-PCR的最佳反应体系: 在20止的反应体系中, Taq酶1.0U, Mg^2+ 2.0mmol·L^-1, dNTP0.20mmol·L^-1, 引物0.4μmol·L^-1, 1×PCR buffer, 30ng模板DNA。在此基础上筛选出14个扩增稳定、多态性丰富的ISSR引物, 并通过梯度PCR试验, 确定引物最佳退火温度。