籽粒苋AmA1基因的克隆、原核表达及植物表达载体构建

编号 zgly0001371325

文献类型 期刊论文

文献题名 籽粒苋AmA1基因的克隆、原核表达及植物表达载体构建

作者 许明  严其煌  黄志伟  程祖锌  杨志坚  郑祥正  郑金贵 

作者单位 农业部海峡两岸农业技术合作中心  福建农林大学农产品品质研究所  福建农林大学作物科学学院 

母体文献 分子植物育种 

年卷期 2009年04期

年份 2009 

分类号 S519 

关键词 籽粒苋  AmA1  基因克隆  原核表达  载体构建 

文摘内容 本文采用RT-PCR方法,从籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)千穗谷1号的幼嫩种子克隆出AmA1基因的完整开放阅读框序列(ORF),其长度为915bp,编码305个氨基酸。经Blast同源性分析,结果表明该序列与GenBank登录的籽粒苋AmA1基因的核苷酸序列基本一致,只在起始密码子下游51bp处由G变成C,但不影响氨基酸的编码。将该基因插入原核表达载体pET28a(+),并转化到大肠杆菌BL21中,经过IPTG诱导,能正确表达出37kD的融合蛋白。同时构建了AmA1基因双T-DNA双标记植物表达载体PCDMAR-AmA1-dsRed2-hpt,该载体含有2个独立的T-DNA区,其中一个T-DNA区含有选择标记基因hpt和可视标记基因DsRed2(红色荧光蛋白基因),另一个T-DNA区含有由水稻胚乳特异性表达启动子pGt1驱动的AmA1基因,在AmA1基因的两侧连有两段正向重复的烟草Rb7MARs,以增强AmA1基因的表达。实验结果为下一步规模化培育稻米氨基酸组成平衡无选择标记的转基因水稻奠定了基础。