牛分支杆菌HBHA基因的克隆及原核表达

编号 zgly0001487743

文献类型 期刊论文

文献题名 牛分支杆菌HBHA基因的克隆及原核表达

作者 赵子惠  温峰琴  项海涛  曾巧英 

作者单位 甘肃农业大学动物医学院 

母体文献 动物医学进展 

年卷期 2015年10期

年份 2015 

分类号 S852.61 

关键词 牛分支杆菌  肝素结合血凝素基因  生物信息学分析  原核表达 

文摘内容 应用PCR技术扩增牛分支杆菌肝素结合血凝素(HBHA)基因并原核表达牛分支杆菌HBHA基因,利用在线分析软件对该基因序列及编码蛋白序列进行生物信息学分析。构建原核表达载体pET28a(+)-HBHA,并转化至大肠埃希菌BL21(DE3),经0.6mmol/L IPTG诱导目的蛋白表达,采用镍离子亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE及Western blot检测表达结果。结果表明,牛分支杆菌HBHA基因完整的ORF全长600bp,编码199个氨基酸。HBHA蛋白为碱性、亲水性蛋白质,含有12个潜在的磷酸化位点,存在抗原表位,亚细胞定位主要存在于细胞核及线粒体中,蛋白空间结构以α-螺旋、无规则卷曲、β-折叠为主。成功构建了原核表达载体pET28a(+)-HBHA并在大肠埃希菌中得到了高效表达,分子质量大小为28ku,主要以可溶性形式存在。说明牛分支杆菌HBHA蛋白是一种抗原指数较高的亲水性蛋白,在原核系统能高效的表达,为进一步研究提供了理论基础。