二化螟钙黏蛋白CAD1的原核表达及与Cry1Ac、Cry2Aa蛋白的结合

编号 zgly0001659379

文献类型 期刊论文

文献题名 二化螟钙黏蛋白CAD1的原核表达及与Cry1Ac、Cry2Aa蛋白的结合

作者 周浩  李博  牛林  邱林  王永 

作者单位 湖北工程学院生命科学技术学院/特色果蔬质量安全控制湖北省重点实验室  华中农业大学植物科学技术学院/昆虫资源利用与害虫可持续治理湖北省重点实验室  广州海关隶属南沙海关  中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室  湖南农业大学植物保护学院 

母体文献 生物安全学报 

年卷期 2018年04期

年份 2018 

分类号 S435.112.1 

关键词 二化螟  钙黏蛋白  原核表达  蛋白结合 

文摘内容 【目的】二化螟是水稻的重要害虫之一,钙黏蛋白(cadherin,CAD)是一类重要的Bt杀虫蛋白受体,在获得二化螟钙黏蛋白基因(Cs CAD1)的基础上,明确Cs CAD1蛋白与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白的结合能力。【方法】利用PCR技术克隆Cs CAD1基因片段,将构建的p ET-28a-(+)-Cs CAD1重组质粒转入原核表达菌株BL21(DE3)中,IPTG诱导表达。目的蛋白经Ni柱亲和纯化后SDS-PAGE电泳检测,利用western blot和ligand blot技术分析其与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白的结合能力。【结果】重组载体可在表达菌株BL21中表达一个约44 ku的蛋白,原核表达载体构建成功。SDS-PAGE显示该蛋白条带单一,且纯度较好。Ni柱亲和层析纯化该目的蛋白后进行Ligand blot分析,结果显示Cs CAD1重组蛋白可以与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白结合。【结论】Cs CAD1蛋白可以与Cry1Ac和Cry2Aa蛋白结合,是潜在的Cry蛋白受体,所得结果有助于阐明Cry1Ac和Cry2Aa蛋白对二化螟的作用机制。