棉铃虫中肠钙黏蛋白Cry1A结合区编码基因的原核表达及多克隆抗体制备

编号 zgly0000700730

文献类型 期刊论文

文献题名 棉铃虫中肠钙黏蛋白Cry1A结合区编码基因的原核表达及多克隆抗体制备

学科分类 220.1520;林木遗传学

作者 黄晶晶  常菊花  陈楚芹  沈晋良  沈文飚 

作者单位 南京农业大学生命科学学院  南京农业大学植物保护学院 

母体文献 江苏农业科学 

年卷期 2010(2)

页码 26-29

年份 2010 

分类号 Q966 

关键词 棉铃虫  钙黏蛋白  原核表达  多克隆抗体 

文摘内容 通过RT-PCR扩增出棉铃虫中肠钙黏蛋白毒素结合区编码基因片段Cad-tb,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,并在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,获得融合表达的包涵体,经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,利用ELISA检测其效价。结果显示,以pET-30a-Cad-tb表达载体转化BL21菌后,经IPTG诱导成功获得分子量为37 ku左右的重组蛋白,单抗-His的Western blot鉴定其正确表达。纯化后的蛋白成功免疫新西兰大白兔,获得了该蛋白的多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16 000。