棉铃虫钙粘蛋白N端多肽多克隆抗体制备及对Bt抗性的初步检测

编号 zgly0001381698

文献类型 期刊论文

文献题名 棉铃虫钙粘蛋白N端多肽多克隆抗体制备及对Bt抗性的初步检测

作者 黄晶晶  韩斌  常菊花  沈文飚  沈晋良 

作者单位 南京农业大学生命科学学院  南京农业大学植物保护学院 

母体文献 昆虫知识 

年卷期 2010年02期

年份 2010 

分类号 S435.622 

关键词 棉铃虫  钙粘蛋白  原核表达  多克隆抗体  Bt抗性 

文摘内容 用重组表达的棉铃虫Helicoverpa armigera(Hübner)中肠钙粘蛋白N端多肽片段制备兔多克隆抗体,并利用其对Bt抗性进行鉴定。通过RT-PCR方法对棉铃虫中肠钙粘蛋白N端多肽的基因片段Cad285进行PCR扩增,将其克隆到pET-30a原核表达载体中,在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导表达,得到35ku的重组融和蛋白,融合表达的包涵体经过变性、Ni-NTA柱亲和纯化、复性等方法处理包涵体,获得可溶性纯化蛋白,用纯化后蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体,ELISA检测其效价高于1∶16000;利用最终获得的多克隆抗体对室内纯合Bt抗/感品系的棉铃虫中肠钙粘蛋白进行Western blot分析,结果显示敏感和抗性品系之间有明显差异,表明其能够应用对Bt抗性进行初步检测。