家蚕BmE(spl)-like基因的克隆与表达谱分析

编号 zgly0001433631

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕BmE(spl)-like基因的克隆与表达谱分析

作者 刘颖硕  陆旋  聂作明  王丹  陈健  吕正兵  张耀洲 

作者单位 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所  河北联合大学冀唐学院  浙江经贸职业技术学院应用工程系 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2012年04期

年份 2012 

分类号 S881.2 

关键词 家蚕  BmE(spl)-like基因  序列特征  原核表达  表达谱 

文摘内容 从本实验室构建的家蚕蛹cDNA文库中筛选到一条新的cDNA序列,生物信息学分析发现其编码的蛋白质序列与果蝇Enhancer of split基因[E(spl)]编码的DNA结合转录调控因子bHLH(helix-loop-helix)有较高的同源性,将该基因命名为BmE(spl)-like(Bombyx mori Enhancer of split like)。该基因的ORF长606 bp,编码201个氨基酸残基,预测蛋白质分子质量22.3 kD,等电点9.7。构建重组表达质粒pET-28a-BmE(spl)-like并在E.coli BL21(DE3)菌株中表达BmE(spl)-like蛋白,经亲和层析和FPLC反向柱纯化融合蛋白His-BmE(spl)-like并制备了抗体效价1∶25 600以上的多克隆抗体。用qRT-PCR方法检测BmE(spl)-like在家蚕成虫发育期的转录水平最高,结合果蝇同源基因的功能,推测该基因与蚕蛾的翅发育相关;该基因在家蚕5龄幼虫各组织中的转录水平以表皮最高,马氏管中最低。Western blotting检测BmE(spl)-like在家蚕5龄幼虫性腺中的表达水平最高,其次是丝腺、表皮、脂肪体、肠组织,在头部、马氏管和气管中的表达水平极低,与qRT-PCR检测的BmE(spl)-like在各组织中的转录水平有些差异。