家蚕Ssu72蛋白基因的克隆及序列与表达分析

编号 zgly0001433624

文献类型 期刊论文

文献题名 家蚕Ssu72蛋白基因的克隆及序列与表达分析

作者 刘立丽  杨巧红  吕正兵  聂作明  王丹  陈健  盛清  吴祥甫  张耀洲 

作者单位 浙江理工大学生命科学学院生物化学研究所  浙江省家蚕生物反应器和生物医药重点实验室 

母体文献 蚕业科学 

年卷期 2012年03期

年份 2012 

分类号 S881.26 

关键词 家蚕  Ssu72蛋白  基因克隆  序列特征  表达谱  荧光定量PCR  免疫印迹分析 

文摘内容 Ssu72(suppressor of sua7-1 clone 2)蛋白的命名源于对酵母sua7-1基因突变的抑制作用,推测其在真核生物RNA聚合酶Ⅱ作用的转录过程中有重要功能。从家蚕蛹cDNA文库中筛选到家蚕Ssu72蛋白基因(BmSsu72)的cDNA序列,利用生物信息学方法分析该基因ORF为579 bp,编码蛋白质含有192个氨基酸残基,具有完整的Ssu72保守结构域,三级结构包含9个α螺旋和4个β折叠,推测α螺旋和β折叠之间可能形成锌指结构。以家蚕蛹cDNA为模板PCR克隆到BmSsu72基因的完整ORF序列,通过构建载体pET-28a(+)-BmSsu72在大肠杆菌中表达并纯化了重组BmSsu72蛋白,进而利用纯化蛋白免疫新西兰大白兔获得多克隆抗体。采用荧光定量PCR检测到BmSsu72基因随着家蚕的生长发育转录水平呈逐渐下降趋势,在卵期的转录水平最高,在蛾期的转录水平最低;该基因在5龄幼虫各组织中的转录水平以马氏管最高,卵巢和丝腺次之。Western blotting检测BmSsu72在家蚕5龄幼虫各个组织中均有表达,其中在丝腺中的表达水平最高。推测BmSsu72可能与家蚕丝腺的分泌相关。