一种高效的苹果褪绿叶斑病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法

编号 zgly0001486536

文献类型 期刊论文

文献题名 一种高效的苹果褪绿叶斑病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法

作者 秦子禹  孙建设  王娜  邵建柱 

作者单位 河北农业大学园艺学院  河北科技师范学院园艺科技学院 

母体文献 植物保护学报 

年卷期 2015年04期

年份 2015 

分类号 S432.41 

关键词 苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)  TaqMan探针  实时荧光定量RT-PCR 

文摘内容 为建立一种检测苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)的Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法,根据ACLSV外壳蛋白基因(coat protein,cp)保守序列设计了特异性引物和Taq Man探针,以构建的ACLSV-cp重组质粒为阳性标准品绘制标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行检验。结果显示,以ACLSV-cp重组质粒为标准品建立的标准曲线相关系数达0.999,扩增效率为103.7%;建立的Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法特异性好,与苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus,ASGV)、苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)、苹果锈果类病毒(Apple scar skin viroid,ASSVd)均无交叉反应;灵敏度为100拷贝/μL,比常规RT-PCR高100倍;批内和批间变异系数均小于0.84%。表明Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法具有特异性强、灵敏性高、重复性好的优点,适用于实际样品中ACLSV的快速准确检测。