TaqMan实时荧光定量PCR检测美国白蛾核型多角体病毒方法的建立

编号 zgly0001677690

文献类型 期刊论文

文献题名 TaqMan实时荧光定量PCR检测美国白蛾核型多角体病毒方法的建立

作者 王承锐  李娜  李恩杰  段立清  张永安  王青华 

作者单位 中国林业科学研究院森林生态环境与保护研究所国家林业和草原局森林保护重点实验室  内蒙古农业大学林学院  中国林业科学研究院华北林业实验中心 

母体文献 环境昆虫学报 

年卷期 2019年04期

年份 2019 

分类号 S433.4 

关键词 美国白蛾核型多角体病毒  TaqMan探针  实时荧光定量PCR  病毒检测 

文摘内容 美国白蛾核型多角体病毒（Hyphantria cunea nudeopolyhedroviurs）是一种对美国白蛾高效、对环境无污染、对天敌及非靶标生物安全的生物杀虫剂。建立高效、快速的定量检测方法对该病毒持续控制美国白蛾具有重要意义。将polh基因构建到pGEM-T-easy载体上,制备标准品质粒,构建标准曲线,对未知样品DNA进行定量PCR检测,根据标准曲线计算样品中美国白蛾核型多角体病毒含量。提取感染病毒不同时间段的美国白蛾幼虫基因组DNA,根据已建立的方法检测并计算每克样本病毒的基因拷贝数。利用TaqMan探针法成功建立了该病毒荧光定量PCR检测方法。以取食3.0×106 OBs/mL浓度病毒的美国白蛾幼虫基因组DNA为模版,进行荧光定量PCR,病毒在幼虫体内的含量在第5天开始出现大幅增长趋势,第6天时达到最高。TaqMan探针法实时荧光定量PCR能简便、高效、快速的检测出大量未知样本基因组DNA中病毒基因的拷贝数,为研究该病毒的传播和流行规律提供了可行的监测方法。