苹果茎痘病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

编号 zgly0001493774

文献类型 期刊论文

文献题名 苹果茎痘病毒TaqMan探针实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立

作者 秦子禹  孙建设  王娜  邵建柱 

作者单位 河北农业大学园艺学院  河北科技师范学院园艺科技学院 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2015年07期

年份 2015 

分类号 S436.611.1 

关键词 苹果茎痘病毒  TaqMan探针  实时荧光定量RT-PCR 

文摘内容 为建立一种检测苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus,ASPV)的Taq Man探针实时荧光定量RT-PCR方法,根据ASPV外壳蛋白基因(coat protein,cp)保守序列设计了特异性引物和Taq Man探针,以体外转录的RNA为标准品构建标准曲线,并对该方法的特异性、灵敏性、重复性进行检验。建立的标准曲线决定系数达0.996,扩增效率为99%;该方法特异性好,与苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)、苹果锈果类病毒(ASSVd)均无交叉反应;其最低检测限为1.31×102 copies·μL-1,灵敏度比常规RT-PCR高100倍;批内和批间变异系数均小于1.85%。该方法具有特异性强、灵敏度高、重复性好等优点,适用于田间样品中ASPV的快速定量检测。