大肠杆菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达

编号 zgly0000550787

文献类型 期刊论文

文献题名 大肠杆菌甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因的克隆与表达

作者 谢启鑫  庄东红  欧阳永长  胡忠  钟名其  彭桂庄 

作者单位 汕头大学生物系  韩山师范学院生物系  江西省农业科学院蔬菜花卉研究所 

母体文献 江西农业学报 

年卷期 2007,19(10)

页码 5-8,15

年份 2007 

分类号 R378.21 

关键词 大肠杆菌  W3350菌株  甘露醇-1-磷酸脱氢酶  基因克隆  原核表达 

文摘内容 以大肠杆菌(Escherichia coli)W3350菌株总DNA为模板，根据已报道的几种生物的甘露醇-1-磷酸脱氢酶(mannitol-1-phosphate dehydrogenase)基因(mtlD)序列设计引物，通过PCR扩增到1条长约1．15kb的特异片断，把该片断连接到pUCm-T载体上进行测序。序列分析结果表明，该基因编码区全长1149bp，共编码382个氨基酸，与报道的mtlD基因修正序列完全一致。将该基因插入到原核表达载体pET28a(＋)，IPTG诱导表达后经SDS-PAGE分析，发现在约45kD处明显比对照多出1条带，凝胶扫描后经Bandscan 5．0软件分析表明，该特异条带的蛋白含量占菌体可溶性总蛋白的72．9％。Western blot检测其为带组氨酸标签的融合蛋白，而质谱分析证实其为甘露醇-1-磷酸脱氢酶。转化子的耐盐能力比对照提高了约20％。该基因提交到GeneBank数据库，返回的接受号为DQ660889。