大肠杆菌cysE和cysM基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

编号 zgly0001411769

文献类型 期刊论文

文献题名 大肠杆菌cysE和cysM基因的克隆、原核表达及多克隆抗体的制备

作者 方堃  白丁平  陈玉林 

作者单位 西北农林科技大学动物科技学院 

母体文献 西北农林科技大学学报(自然科学版 

年卷期 2011年11期

年份 2011 

分类号 S827  Q78 

关键词 大肠杆菌  丝氨酸乙酰转移酶基因  O-乙酰丝氨酸硫化氢解酶基因  基因克隆 

文摘内容 【目的】克隆大肠杆菌半胱氨酸合成酶(包括丝氨酸乙酰转移酶(cysE)和O-乙酰丝氨酸硫化氢解酶(cysM))的基因,对其进行原核表达,并制备相应蛋白的抗体。【方法】用PCR方法从大肠杆菌BL21(DE3)中扩增cysE和cysM基因,构建其原核表达载体pET32a(+)-cysE和pET32a(+)-cysM,对其进行BamHⅠ和SacⅠ双酶切鉴定和测序验证后转入大肠杆菌中进行诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE和Western blot(以His抗体作为一抗)检测。用纯化的cysE和cysM蛋白作为抗原免疫新西兰大耳白兔,制备多克隆抗体,并通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价。【结果】PCR获得了822bp的cysE基因和912bp的cysM基因。原核表达质粒pET32a(+)-cysE和pET32a(+)-cysM构建成功,并可在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,表达的cysE和cysM重组蛋白分子质量分别为56和58ku。制备的多克隆抗体具有较强的免疫结合活性,抗体滴度均达到1∶102 400。【结论】成功克隆了大肠杆菌cysE和cysM基因,并实现了原核表达,同时制备出了相应的多克隆抗体。