米曲霉(Aspergillus oryzae)果胶酸内切水解酶(PGA)在原核系统中重组表达

编号 zgly0000495888

文献类型 期刊论文

文献题名 米曲霉(Aspergillus oryzae)果胶酸内切水解酶(PGA)在原核系统中重组表达

作者 张宇玲  赵庆新  朱泓  孙静  韩丰敏  袁生 

作者单位 江苏省生物多样性和生物技术重点实验室 

母体文献 生物工程学报 

年卷期 2007,23(1)

页码 101-105

年份 2007 

分类号 Q786 

关键词 米曲霉  果胶酸水解酶  大肠杆菌  原核表达 

文摘内容 果胶酶具有广阔的商业用途, 在食品工业上主要用于果汁和酒类的澄清、提高植物油的提取率、提高水果的硬度和植物纤维脱胶。米曲霉(Aspergillus oryzae)一直用于传统发酵食品的生产, 自然条件下其果胶酶的产量较低。文献报道的果胶酶的重组表达成功的例子较少, 且活性较低。通过RT-PCR的方法, 获得不含信号肽的果胶酸内切水解酶A(polygalacturonase A, PGA)的cDNA, PGA cDNA连入pET-28a(+)载体, 构建pET-28a(+)-pga质粒。pET-28a(+)-pga转化Turner(DE3)placⅠ细胞, 得到转化子pET-28a(+)-pga-Turner(DE3)placⅠ, 首次实现了米曲霉PGA在大肠杆菌系统中过表达, 进一步对PGA在大肠杆菌系统中表达的条件进行了研究。在37℃、220r/min条件培养pET-28a(+)-pga-Turner(DE3)placⅠ细胞, OD600至0.8左右时, 用500μmol/L isopropyl β-D-thiogalactogalactopyranoside(IPTG)进行诱导表达, 在15℃和170r/min条件下继续培养24h, 表达效果最好, 相时于每毫升培养基而言, 产酶可达到70u/mL, 是米曲霉自然条件产酶量的87.5倍, 远优于文献报道的重组表达的PGA酶活。