羽衣甘蓝ARC1蛋白的原核表达、纯化及泛素连接酶活性分析

编号 zgly0001456869

文献类型 期刊论文

文献题名 羽衣甘蓝ARC1蛋白的原核表达、纯化及泛素连接酶活性分析

作者 蓝兴国  李晓屿  杨佳  李玉花 

作者单位 东北林业大学生命科学学院 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2013年12期

年份 2013 

分类号 S681.9 

关键词 羽衣甘蓝  自交不亲和性  ARC1  原核表达  泛素连接酶 

文摘内容 ARC1是植物特有的一类含有U-box/ARM结构域的蛋白,在芸薹属植物自交不亲和(self-incompatibility,SI)信号转导中起着正向调控因子的作用。将羽衣甘蓝(Brassica oleracea var.acephala)BoARC1编码区的序列连接到原核表达载体pET-14b上,通过酶切鉴定和测序分析,构建pET-14bBoARC1表达质粒;将获得的阳性表达质粒转化到大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)pLysS中,利用IPTG进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示,在分子量69 kD处有BoARC1蛋白特异性地诱导表达;利用Ni2+-NTA树脂通过亲和层析的方法获得BoARC1融合蛋白。在泛素激活酶(E1)、泛素结合酶UBC7(E2)和泛素体外泛素化反应后,通过免疫印迹的方法检测,显示出BoARC1融合蛋白能够将底物进行多泛素化修饰;当U-box中保守位点第323位Pro突变为Ala或其他泛素化组分缺少时,底物不能被泛素化修饰。