羽衣甘蓝ARC1与Exo70A1蛋白相互作用结构域的分析与鉴定

编号 zgly0001493746

文献类型 期刊论文

文献题名 羽衣甘蓝ARC1与Exo70A1蛋白相互作用结构域的分析与鉴定

作者 曹明明  杨佳  李晓屿  李玉花  蓝兴国 

作者单位 东北林业大学生命科学学院 

母体文献 园艺学报 

年卷期 2015年04期

年份 2015 

分类号 S635.9 

关键词 羽衣甘蓝  自交不亲和性  ARC1  Exo70A1  结构域 

文摘内容 为阐明羽衣甘蓝自交不亲和信号传递因子ARC1与下游底物Exo70A1相互作用的结构域,利用酵母双杂交系统进行检测与分析。将羽衣甘蓝Bo ARC1、Bo ARC1-N端(1~279 aa,含有UND结构域)及Bo ARC1-C端(280~663 aa,含有U-box结构域和Arm repeat结构域)的序列分别构建到p GBKT7载体中,获得BD-ARC1、BD-ARC1-N和BD-ARC1-C重组质粒。将羽衣甘蓝Bo Exo70A1、Bo Exo70A1-Δ1(1~85 aa)、Exo70A1-Δ2(1~270 aa)及Exo70A1-Δ3(271~638 aa,含有Exo70结构域)的序列分别构建到p GADT7载体中,获得AD-Exo70A1、AD-Exo70A1-Δ1、AD-Exo70A1-Δ2和AD-Exo70A1-Δ3重组质粒。将获得的重组质粒分别共转化到酵母Y187菌株中,在双缺陷(-Leu-Trp)酵母培养基中培养与生长。β-gal显色检测结果表明,共转BD-ARC1-N/Bo Exo70A1-Δ1或BD-ARC1-N/Bo Exo70A1-Δ2的酵母在滤纸上显示蓝色,这说明Bo ARC1的N端与Bo Exo70A1的N端介导了两者的相互作用。