用同源重组法将人肝金属硫蛋白突变体ββ基因整合在集胞藻6803中表达

编号 zgly0001241548

文献类型 期刊论文

文献题名 用同源重组法将人肝金属硫蛋白突变体ββ基因整合在集胞藻6803中表达

作者 宋凌云  施定基  宁叶  罗娜  邵宁  俞梅敏  茹炳根 

作者单位 北京大学生命科学学院!北京100871  中国科学院植物研究所  北京100093  中国科学院植物研究所!北京100093 

母体文献 植物学报 

年卷期 2001年04期

年份 2001 

分类号 Q51 

关键词 人肝金属硫蛋白ββ突变体  集胞藻6803  单交换  同源重组  蓝藻基因工程  铜去除 

文摘内容 将集胞藻 （Synechocystissp .）PCC 6 80 3上psbB的一段序列 （从 # 6 93bp到 # 2 5 6 3bp）插入pBluescriptKS的多克隆位点 ,构建带有整合平台的载体pKSB。再将人工合成的 ββ基因插入中间载体pRL439上启动子PpsbA的下游 ,并将pRLββ上PpsbA和 ββ基因插入pKSB构建成整合表达载体pKSBββ。利用自然转化将整合表达载体导入集胞藻 6 80 3,并通过单交换同源重组使 ββ基因整合到集胞藻 6 80 3基因组DNA上。逐步提高氨苄青霉素浓度 ,筛选得到遗传性状稳定的转基因集胞藻 6 80 3。PCR检测转基因集胞藻 6 80 3,结果证实 ββ基因已整合到集胞藻 6 80 3的染色体上 ;Westernblotting结果表明 ,ββ基因在转基因集胞藻 6 80 3细胞中得到表达 ,ELISA测定表明在 5 0 μmol/L的Zn2 +诱导下 ββ在新鲜集胞藻 6 80 3中的蛋白表达量为 0 .739mg/g ;重金属耐受性实验表明 ,得到能耐受Cu2 +的转基因集胞藻 6 80 3。经原子吸收光谱法测定 ,转基因集胞藻 6 80 3在含低浓度Cu2 +（10 μmol/L）的培养液中对Cu2 +的去除率可达到 82 %